БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 8, с. 1448–1459
УДК 577.152.1
Синтез в Еscherichia coli и некоторые свойства гибридного белка, состоящего из модифицированного предшественника адренодоксинредуктазы и укороченного предшественника адренодоксина
Поступила в редакцию 28.12.1995
После доработки 31.01.1996
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: адренодоксин, адренодоксинредуктаза, предшественник, гибрид, модификация, энзиматическая активность, митохондриальный импорт.
Аннотация
Работа посвящена выяснению некоторых аспектов формирования и функционирования холестерингидроксилазной системы, включающей цитохром P450scc, адренодоксин и адренодоксинредуктазу. В клетках Е. coli осуществлен синтез гибридного белка, N-концевой домен которого представляет собой модифицированную форму предшественника (NADPH)адренодоксинредуктазы, а С-концевым доменом является адренодоксин. Модификация редуктазы состояла в увеличении ее адресующей препоследовательности на 12 аминокислотных остатков с N-конца. Каталитически активные домены были связаны линкером из 17 остатков, являющимся укороченным с N-конца вариантом предшественника адренодоксина. Показано, что гибрид обладает способностью восстанавливать экзогенный цитохром P450scc. Следовательно, ни наличие 44-членного пептида (т.е. модифицированной адресующей препоследовательности) на N-конце редуктазы, ни разделение редуктазы и адренодоксина 17-членным линкером не препятствуют взаимодействию их активных центров в единой белковой молекуле. Указанные модификации не мешают также присоединению простетических групп и формированию активных центров двух ферментов в клетках Е. соli. Модифицированная N-концевая препоследовательноость гибрида допускает его импорт в гетерологические митохондрии.