БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 8, с. 1395–1407
УДК 577.352.3
Использование селективной химической модификации цитохрома P450scc (CYPXIA1) флуоресцеинизотиоцианатом для оценки внутримолекулярных расстояний и конформационных изменений с помощью резонансного переноса энергии флуоресценции
Поступила в редакцию 18.10.1995
После доработки 24.01.1996
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: цитохром P450scc, флуоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ), химическая модификация, перенос энергии флуоресценции.
Аннотация
Химическая модификация цитохрома P450scc флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) приводит к селективному, включению флуоресцентной метки по Lys338. Аффинной хроматографией на иммобилизованном адренодоксине показано, что цитохром P450scc, содержащий флуоресцентную группу, сохраняет способность к физическому взаимодействию с ферредоксином. Включение флуоресцентной метки также не оказывает значительного влияния на ферментативную активность гемопротеида на стадии переноса первого электрона. По эффективности внутримолекулярного резонансного переноса энергии флуоресценции в донорно-акцепторной паре определено расстояние между гемовой группой и содержащим метку Lys338 (2,81 нм), а также изменения этого расстояния при переходе цитохрома P450scc из высоко- в низко-спиновое состояние, из олигомерной формы в мономерную; при его превращении в цитохром Р420 путем термической или щелочной обработки и при полном разворачивании белковой глобулы в 6 М гуанидингидрохлориде. Сделан вывод о том, что химическая модификация цитохрома P450scc ФИТЦ, приводящая к селективному включению флуоресцентной метки, является информативным методическим подходом, позволяющим следить за конформационными изменениями молекулы цитохрома P450SCC в процессе ферментативного катализа.