БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 7, с. 1241–1249
УДК 577.152.1
Исследование Сu-центра мембраносвязанной метанмонооксигеназы из субклеточных структур Мethylococcus capsulatus, штамм М
Поступила в редакцию 03.01.1996
После доработки 14.03.1996
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: метанмонооксигеназа, рММО, Cu-белок, активный центр рММО, диэтилдитиокарбамат.
Аннотация
Мембраны из клеток метилотрофа Methylococcus capsulatus, штамм М, содержат рММО, которая катализирует окисление CH4 до СНзОН. Фермент полностью инактивируется комплексообразующим агентом диэтилдитиокарбаматом. Ионы Сu2+ восстанавливают активность рММО до исходного уровня. В высоких концентрациях Сu2* приводит к необратимой инактивации рММО. Fe2+, Мn2+ и Ni2+ в реактивации рММО не эффективны. Комплекс ДДТК-Сu2* активного центра рММО экстрагируется из лиофилизованных мембран ацетоном. По данным тонкослойной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и спектрам поглощения экстрагированный из белка комплекс идентичен комплексу ДДТК-Сu2+, полученному синтетически. Активность рММО подавляется имидазолом (5 мМ) и реактивируется только ионами меди. Мембраны, лишенные, меди, не восстанавливали активность рММО после добавления экстрагированного комплекса. Однако при добавлении меди к таким мембранам активность рММО восстанавливалась на 10% по сравнению с активностью нативных мембран. Предполагается, что медь входит в состав активного центра рММО, комплексуется с белком через остатки гистидина и расположена в легко доступной области белковой глобулы. Сu-Центр рММО, по-видимому, участвует в транспорте электрона или в регуляции активности рММО, либо обладает обеими этими функциями.