БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 6, с. 1106–1118
УДК 577.152.3
Природные субстраты уридилилполинуклеотид-(5’P→O)-тирозин фосфодиэстеразы — фермента, гидролизующего ковалентную связь между РНК и ВПг пикорнавирусов, и их синтетические модели.
Поступила в редакцию 20.12.1995
После доработки 29.01.1996
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: пикорнавирусы, ковалентный комплекс РНК-ВПг, уридилилполинуклеотид-(5'P→O)-тирозин фосфодиэстераза (unlinking enzyme), олигонуклеотид-(5'-Р →O)-тирозин, 125 I-мечение in vitro.
Аннотация
Методом активных N-гидроксибензотриазоловых фосфодиэфиров получено фосфодиэфирно е производное 3,5-[125 I] дииодтирозина и 5′-[32Р]олигодезоксинуклеотида, имитирующее природное соединение РНК-белок пикорнавирусов. Методом изотопного обмена атомов иода в остатке тирозина удалось увеличить удельную активность модельного соединення в 50 раз. Установлено, что исследуемый «расщепляющий» фермент не гидролизует фосфодиэфирную связь между остатком тирозина и олигодезоксинуклеотидом. Из соединения РНК-Кп вируса энцефаломиокардита обработкой нуклеазой S1 получен 5′-концевой фрагмент РНК, связанный с К-пептидом. Установлено, что этот фрагмент расщепляется ферментом с большей скоростью, чем исходное соединение РНК-Кп. Разработан двухстадийный способ получения соединений РНК-белок и РНК-Кп пикорнавирусов с высокой удельной активностью, избирательно меченных по белковой части 1251. На первой стадии алифатические аминогруппы полипептида в комплексе РНК-ВПг или РНК-Кп селективно ацилировали активированным эфиром гидроксифенилпропионовой кис-лоты, остаток которой на второй стадии иодировали радиоактивным Nal в присут-ствии хлорамина Т. Удельная радиоактивность меченных таким образом соединений превышала в 15-30 раз удельную активность их при избирательном введении метки в белок реагентом Болтона-Хантера. Метод может быть полезен для высокоэффективного и селективного введения метки в белковую часть других нуклеопротеидов одновременно по аминогруппам белка и остаткам тирозина.