Выделение и характеристика Экамулина — активатора протромбина из яда эфы многочешуйчатой (Echis multisquamatus).

Аннотация

Фермент Экамулин – активатор протромбина выделен из яда среднеазиатской эфы многочешуйчатой или песчаной (Echis carinatus multisquamatus) и очищен в 63 раза с выходом 57% по активности при использовании ионообменной хроматографии. По своему действию на протромбин он сходен с Экарином – активатором протромбина из яда пилочешуйчатой эфы (Echis carinatus), однако по физико-химическим свойствам значительно отличается от последнего. Экамулин является металлопротеиназой, содержащей 1 моль цинка на 1 моль белка. Молекулярная масса, определенная методом гель-фильтрации на сефакриле S-400SF в присутствии 8 М мочевины, составляла 93 ± 2 кДа. При Ds-Na-электрофорезе в ПААГ в отсутствие восстанавливающих агентов фермент двигается двумя белковыми полосами с молекулярными массами 67 и 27 к Да, а после добавления β меркаптоэтанола – в виде трех полос с молекулярными массами 67, 14 и 13 кДа. При электрофорезе в ПААГ в неденатурирующих условиях активатор двигается одной медленно мигрирующей полосой, а после добавления β-меркаптоэтанола в виде двух более подвижных полос. Углеводный компонент локализован в цепи с молекулярной массой 67 кДа. Фермент существует в двух изоформах (S2 и S3), различающихся по заряду и удельной свертывающей активности: S2-форма имеет активность 250 NIH ед/мг, S3-форма – 524 NIH ед/мг. Изоэлектрическая точка у обеих изоформ в пределах 4,3-4,5, молярный коэффициент поглощения А280 1%-ного раствора – 10,2. Экамулин проявляет слабую фибриногенолитическую активность, но не обладает казеинолитической или фибринолитической активностью. Фермент характеризуется высокой амидазной активностью по отношению к хромогенному субстрату, специфичному для калликреина плазмы, S2302, и слабой – по отношению к субстрату для тканевого калликреина: S2266. Фермент не обладал БАЕЕ, ТАМЕ или ТЛМЕ-эстеразной активностью, амидазной активностью по отношению к субстратам, специфичным для фактора Ха, тромбина, активированного Протеина С и плазмина. Амидазная активность ингибируется ЭДТА (необратимо) и о-фенантролином (активность восстанавливается после добавления ионов Zn2+), однако она не ингибируется Э Г ТА. Такие ингибиторы, как фенилметилсульфонилфторид, диизопропилфторфосфат, пепстатин А, леупептин, n-хлормеркурийбензоат, иодацетамид, хлорметилкетоны фенилаланина или лизина не эффективны. При инкубации с очищенным протромбином Экамулин активирует протромбин в α-тромбин через стадию мезотромбина в реакции, не требующей присутствия Са2+, фосфолипидов или других кофакторов. Некоторые положения данной статьи были доложены на международной конференции “Фибриноген и фибринолиз”, Ялта, 23-28 сентября 1995 г.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: