БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 4, с. 745–754
УДК 577.152.3
Анализ влияния замен Lys(-20) в сигнальном пептиде щелочной фосфатазы на секрецию этого фермента
Поступила в редакцию 04.12.1995
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: щелочная фосфатаза, E coli, замены аминокислот, супрессорные тРНК, сигнальный пептид, секреция белков.
Аннотация
Изучено влияние замен положительно заряженного Lys(-20) в N-концевом домене сигнального пептида щелочной фосфатазы E. coli на секрецию этого фермента. Для получения мутантных щелочных фосфатаз использован амбер-супрессорный метод: с помощью олигонуклеотиднанравленного мутагенеза введена амбер-мутация в соответствующее положение щелочной фосфатазы и осуществлен синтез мутантных белков в штаммах Е. coli, продуцирующих амбер-супрессорные тРНК, специфичные к Туr, Gly, Ala, Glu, Phe, His, Cys и Pro. Все мутантные белки способны к транслокации через цитоплазматическую мембрану и образованию в периплазме обладающей ферментативной активностью молекулы. Однако некоторые аминокислотные замены снижают скорость созревания белка. Их влияние зависит не только от заряда аминокислотного остатка, но и от его природы. Так, введение положительно заряженного His и полярного незаряженного Туr влияет незначительно, в то время как введение отрицательно заряженного остатка Glu и гидрофобных Ala, Phe и Pro, а также Gly и Cys оказывает ингибирующее действие. Полученные результаты свидетельствуют о важности первичной структуры N-концевого домена сигнального пептида в секреторном процессе.