БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 3, с. 412–428
УДК 577.152.344
Конформационные изменения комплекса гликопротеидов IIb-IIIа мембраны тромбоцитов, стимулированные моноклональным антителом к n-концевому участку гликопротеида IIIа
Поступила в редакцию 25.09.1995
После доработки 20.11.1995
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: интегрины, комплекс гликопротеидов IIb-IIIа, тромбоциты, фибриноген, моноклональные антитела.
Аннотация
При активации тромбоцитов мембранный комплекс гликопротеидоп (ГП) IIb-IIIа (α11bβ3интегрин) меняет спою конформацию и это приводит к связыванию адгезивных белков, содержащих аминокислотную последовательность Arg-Gly-Asp (RGD), и к экспрессии новых, лиганд-индуцирусмых мест связывания (LIBS) на молекуле ГПIIbIIIа. Моноклональное антитело (моноАТ) CRC54, эпитоп которого расположен в N-концевой части молекулы ГПIIIа, так же как и его F(аЬ)-фрагменты, связывается не более чем с 10% ГПIIb-IIIа па поверхности покоящихся тромбоцитов. Однако связывание CRC54 существенно увеличивается при активации тромбоцитов тромбином, адгезии тромбоцитов на пластик, взаимодействии ГПIIb-IIIа с RGDS-пептидом и при диссоциации комплекса в присутствии ЭДТА. Эти данные указывают на то, что CRC54 направлено против LIBS-эпитопа на молекуле ГПIIIа. Этот эпитоп отличается от эпитопов других известных конформационно-зависимых антител против ГПIIb-IIIа (LIBS1, LIBS2, LIBS6, PMI-1, р155, р180), так как эти антитела не блокировали связывание CRC54 с ГПIIb-IIIа на поверхности адгезированных тромбоцитов. В отличие от цельных тромбоцитов связывание ГПIIb-IIIа из лизата тромбоцитов, обработанных тритоном X-100, с иммобилизованным CRC54 не зависело от присутствия RGDS-пептида. В тех же условиях другое анти-LIBS антитело р180, направленное против ГПIIb, сохраняло способность различать RGDS-оккупированпую и покоящуюся конформации lTIIIb—IIIa. CRC54 и его F(ab)-фрагменты индуцировали агрегацию тромбоцитов как в обогащенной тромбоцитами плазме, так и в суспензии отмытых тромбоцитов. CRC54 также стимулировало связывание с тромбоцитами лиганда ГПIIb-IIIа – фибриногена, меченного 125I, и адгезию 51Cr-меченных тромбоцитов к иммобилизованным лигандам – фибриногену и фибронектину. CRС54-Зависимая агрегация полностью блокировалась RGDS-пептидом и антителом CRC64, ингибирующим свя-зывание ГПIIb- IIIа с лигандами. Однако ингибитор активации тромбоцитов – простагландин Е1 (ПГЕ1) и смесь метаболических ингибиторов дезоксиглюкоза-азид натрия лишь частично ингибировали CRC54-зависимую агрегацию. Инкубация тромбоцитов с CRC54 индуцировала связывание с тромбоцитами анти-ГПIIb LIBS антитела р180 и анти-ГПIIb-IIIа активационно-зависимого антитела р155. Связывание ГПIIb- IIIa из лизата тромбоцитов, обработанных CRC54, с иммобилизованными р180 и р155 было также в несколько раз выше, чем связывание ГПIIb- IIIа из лизата контрольных тромбоцитов. Полученные данные позволяют заключить, что переход ГПIIb-IIIа в активированное состояние и его взаимодействие с лигандами индуцируют конформационные изменения в N-концевой части ГПIIIа и связывание CRC54 с N-концевой частью ГПIIIа стимулирует конформационные изменения ГПIIb-IIIа, взаимодействие комплекса с лигандами и агрегацию тромбоцитов.