БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 2, с. 296–307
УДК 577.175.$
Спектральные исследования активного центра церулоплазмина при удалении и возвращении в него ионов меди
Поступила в редакцию 24.05.1995
После доработки 21.07.1995
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: церулоплазмин, ионы меди, медьсодержащие белки, медьсвязывающие центры, голубые оксидазы, спектральные свойства.
Аннотация
С помощью диализа против KCN из церулоплазмина (ЦП; ферро-О2-оксидо-редуктаза, КФ 1.16.3.1.) постепенно удаляли ионы Сu2+ разных типов. Образцы белка отбирали через 2, 4, 6, 22 и 28 ч после начала диализа. Методом атомно-абсорбционной спектрофотометрии определяли количество атомов меди па молекулу ЦП. Регистрировали также спектры поглощения в УФ и видимой области, флуоресценции и ЭПР. Совокупность полученных данных позволила проследить последовательность удаления определенных ионов Сu2+ из молекулы ЦП, В ходе реконституции активного центра, используя те же методы, удалось установить зависимость возвращения на место тех или иных ионов Сu2+ от глубины предшествовавшей деструкции каталитического центра. Показано, что для эффективного восстановления оксидазной активности Ц П после диализа против KCN в активном центре фермента должны оставаться ионы Cu2+ III типа. Полученные результаты позволяют точнее оценить роль ионов Сu2+ разных типов в сборке сложного каталитического центра ЦП и в осуществлении ферментом его многообразных функций.