БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 2, с. 275–287
УДК 577.152.1
Сравнительное исследование влияния температуры на бактериальные люциферазы
Поступила в редакцию 18.05.1995
После доработки 22.09.1995
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: бактериальная люцифераза, температура, энергия активации.
Аннотация
Исследовано влияние температуры на характеристики биолюминесценции бактериальных люцифераз светящихся бактерий Vibrio harveyi, Vibrio fischeri, Photobacterium leiognathi и Photobacterium phosphoreum. Показано, что наибольший уровень свечения чистых люцифераз наблюдался в области 15-25° для Р. phosphoreum, 20-30° для V. fischeri и Р. leiognathi и 30-37° для V. harveyi. Повышение концентрации соли, уменьшение pH среды инкубации, добавление дитиотреитола (ДТТ) и ЭДТА приводило к значительной стабилизации всех люцифераз. Добавление ДТТ и ЭДТА сказывалось только па обратимой стадии инактивации, а увеличение концентрации соли замедляло также скорость необратимой стадии. При необратимой инактивации люциферазы на гель-хроматограмме обнаружен пик, соответствующий агрегированному белку. Для всех люцифераз рассчитаны энергии активации биолюминесцентной реакции с деканалем, до- и тетрадеканалем, а также для безальдегидного свечения. Показано, что энергия активации реакции с тетрадеканалем значительно ниже, чем с другими альдегидами. Исследование температурной зависимости времени жизни долгоживущего интермедиата показало, что в интервале 10-30° все люциферазы, кроме V. harveyi, имеют лишь одну активную форму.