БИОХИМИЯ, 1996, том 61, вып. 1, с. 152–159
УДК 577.158.54
Физико-химические свойства рекомбинантной люциферазы светляков Luciola mingrelica и ее мутантных форм
Поступила в редакцию 06.09.1995
После доработки 12.10.1995
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: люцифераза светляков, мутагенез, рекомбинантная люцифераза, стабильность люциферазы.
Аннотация
Исследованы физико-химические свойства рекомбинантной люциферазы L. mingrelica, синтезируемой клетками E. coli. Показано, что каталитические свойства и спектральные характеристики рекомбинантной и нативной люцифераз одинаковы, но рекомбинантная люцифераза менее стабильна за счет присутствия дополнительного остатка Cys. Методом сайт-специфического мутагенеза получены мутантные формы люциферазы светляков L. mingrelica с точечными заменами Cys-82→Ala, Cys-260→Аlа, Cys-393→Ala, Thr-204→Asp. Мутации Cys-82, 260, 393→Аlа лишь несколько увеличили Km по АТР и люциферину, но не повлияли на k каТ. Мутант с заменой Cys-393→Ala оказался более стабильным по сравнению с нативной люциферазой. Мутация Thr-204→Asp привела к увеличению Km АТР в 8 раз, а kКат – в 2 раза, что указывает на вероятную локализацию Thr-204 в АТР-связывающей области люциферазы. Показано стабилизирующее действие дитиотреитола, этиленгликоля, БСА и трегалозы на рекомбинантную люциферазу и мутантные формы фермента.