БИОХИМИЯ, 1995, том 60, вып. 1, с. 124–130
УДК 577.152.1
Получение моноклональных антител к Е1-компоненту и их использование для исследования пируватдегидрогеназного комплекса
Поступила в редакцию 13.07.1994
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: пируватдегидрогеназа, моноклональные антитела, антигенная детерминанта.
Аннотация
Получены моноклональные антитела F7F10 против компонента E1 пируватдегидрогеназного комплекса грудных мышц голубя. Определена константа диссоциации комплекса антиген-мАТ, равная 5,93-10-8 М. Показано перекрестное реагирование мАТ с Е1 ПДК из различных организмов, включая человека. Методом иммуноблоттинга показано взаимодействие мАТ F7F10 как с α-, так и с β-субъединицами Е1, что свидетельствует о вхождении в состав антигенной детерминанты аминокислотных остатков обоих субъединиц. Связывание мАТ F7F10 с антигеном не влияет на ферментативную активность Е1, изолированного или интегрированного в составе комплекса, но вызывает быструю инактивацию ПДК в пируват:NAD+-оксидоредуктазной реакции. Методом иммуноферментного анализа показана конкуренция мАТ F7F10 и компонента Е2 ПДК за связывание с Е1. Сделан вывод о возможности перекрывания антигенной детерминанты и участка молекулы Е1, ответственного за Е1-Е2-взаимодействие в структуре комплекса.