БИОХИМИЯ, 1995, том 60, вып. 1, с. 105–117
УДК 577.152.3
Кинетика действия киназы фосфорилазы в каскадной ферментной системе. II. Оценка начальной скорости ферментативной реакции, катализируемой киназой фосфорилазы
Поступила в редакцию 16.06.1994
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: мышечная киназа фосфорилазы, определение ферментативной активности, мышечная гликогенфосфорилаза, ферментативная кинетика, каскадные ферментные системы.
Аннотация
Предложен турбидиметрический метод определения ферментативной активности киназы фосфорилазы. Реакционная смесь наряду с компонентами, киназной реакции содержала субстраты гликогенфосфорилазы а (продукта киназной реакции) – гликоген и глюкозо-1-фосфат (или неорганический фосфат). Кинетика функционирования каскадной ферментной системы регистрируется по увеличению (или снижению) оптического поглощения ΔА раствора гликогена во времени (t) при 360 нм. Начальная скорость ферментативной реакции, катализируемой киназой фосфорилазы, рассчитывается по формуле vo – 2tga/a2, где tgа – начальный наклон кинетических кривых в координатах ΔА-t2 и a2 – удельная ферментативная активность фосфорилазы а. Величина а2 рассчитывается из значений начальных скоростей фосфорилазной реакции, измеренных по изменению оптической плотности после добавления гликогена к реакционной смеси, в которой киназная реакция полностью завершилась. Надежность предложенного турбидиметрического метода определения активности киназы фосфорилазы доказана сопоставлением его с прямым методом, основанным на измерении количества включенного 32Р.