БИОХИМИЯ, 1995, том 60, вып. 1, с. 88–104
УДК 577.152.241
Медленная активация мышечной гликогенфосфорилазы b при инкубации фермента с аденозин-5′-монофосфатом
Поступила в редакцию 03.10.1994
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: мышечная гликогенфосфорилаза b, медленная активация, ферментативная кинетика, гликоген.
Аннотация
Проведены измерения ферментативной активности гликогенфосфорилазы b из скелетных мышц кролика в направлении синтеза гликогена турбидиметрическим методом и по образованию неорганического фосфата с различным порядком добавления компонентов реакционной смеси при запуске ферментативной реакции. При использовании в качестве высокомолекулярного субстрата гликогена с молекулярной массой (264-276) · 10^6 Да обнаружено, что 10-15-минутная преинкубация фермента с аллостерическим активатором (АМР) приводит к увеличению начальной скорости ферментативной реакции (v) в сравнении с соответствующим значением v, рассчитанным при запуске ферментативной реакции смесью глюкозо-1-фосфата и АМР (0,02 М Hepes, рH 6,8; 37°). При концентрации АМР, равной 1 мМ, процесс протекающей во времени активации фермента под действием АМР подчиняется экспоненциальному закону с кажущейся константой скорости реакции первого порядка, равной 0,43 мин-1 (регистрация ферментативной активности турбидиметрическим методом). С увеличением концентрации АМР степень активации фосфорилазы b достигает предельного значения, равного 1,75 (6 мМ глюкозо-1-фосфат, гликоген 0,2 мг/мл). Эффект активации уменьшается с ростом концентрации гликогена и практически отсутствует при насыщающих концентрациях высокомолекулярного субстрата. Инкубация фосфорилазы b с АМР сопровождается уменьшением константы Михаэлиса для глюкозо-1-фосфата. Предполагается, что индуцируемые аллостерическим активатором относительно медленные конформационные изменения молекулы фосфорилазы b проявляются в ферментативной кинетике при использовании фракции гликогена с молекулярной массой порядка нескольких сотен миллионов дальтон благодаря взаимодействиям между адсорбированными на гликогеновой частице молекулами фермента, приводящим к повышению сродства фосфорнлазы b к гликогену.