БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 11, с. 1698–1706
Исследование вращательной подвижности E1- и E2-конформеров Cа-атразы в мембранах саркоплазматического ретикулума с использованием метода анизотропии фосфоресценции с высоким временным разрешением
Поступила в редакцию 23.05.1994
Аннотация
Мембранные препараты Са-АТРазы саркоплазматического ретикулума скелетных мышц кролика ковалентно метили эозин-5′-изотиоцианатом по остатку Lys-515 в активном центре фермента и 5-(иодацeтамидо)эозином предположительно по остаткам Cys-670 и Cys-674. Полученные препараты использовали для измерения индуцированной лазерной вспышкой анизотропии фосфоресценции в микросекундном временном интервале. Анализ влияния диэтилового эфира, глицерина, кратковременной термообработки, неионного детергента С12Е9 и ряда лигандов Са-АТРазы, фиксирующих фермент в E1- или Е2-конформационных состояниях, на параметры анизотропии фосфоресценции показал, что Са-АТРаза в мембранах ретикулума находится как в мономерном состоянии, так и в виде олигомерных комплексов разного размера. Переход фермента из E1- в Е2-конформацию сопровождается увеличением количества олигомерных комплексов и их среднего размера, что подтверждает гипотезу об изменении олигомерного состояния Са-АТРазы в ходе реакционного цикла.