БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 10, с. 1544–1559
Анса-анализ. IV. спектры специфичности в характеристике протеаз и их смесей
Поступила в редакцию 01.03.1994
Аннотация
Исследованы возможности применения метода АНСА-анализа для характеристики индивидуальных протеаз и их смесей. Метод основан на расщеплении под действием протеаз смесей конкурирующих хромогенных субстратов, содержащих аминонафталинсульфонамидные (АНСА) детектируемые группы, и хроматографическом определении АНСА-продуктов протеолиза каждого из субстратов. Хроматограммы продуктов протеолиза (АНСА-спектры) индивидуальны для каждого из ферментных препаратов и могут использоваться для идентификации, как фингерпринты. Рассмотрены методы сравнения АНСА-спектров. Для количественной оценки различий в специфичности анализируемых препаратов используется векторное представление АНСА-спектров, при котором степень различия характеризуется углом между векторами. Идентификация ядов змей семейств Viperidae и Crotalidae проведена по АНСА-спектрам, снятым в смеси шести пептидных субстратов, расщепляющихся по связям Arg-ANSA. Показано, что яды змей разных видов достоверно различимы по АНСА-спектрам. Продемонстрирована возможность количественного анализа смесей ядов.