БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 10, с. 1497–1502
Взаимодействие нативного 5′-АТР с плазматическими мембранами печени и жировой ткани крыс
Поступила в редакцию 29.11.1993
Аннотация
Проведено исследование специфического связывания и ферментативного гидролиза нативного 5′-АТР плазматическими мембранами печени и жировой ткани крыс. Добавление к мембранам [ 14С] АТР приводило к его быстрому дефосфорилированию по схеме АТР → ADP→ АМР → аденозин, что свидетельствует о высокой фосфатазной активности изучаемых мембранных препаратов. Кинетические характеристики связывания 5′-АТР (меченного 33Р или 3Н) с мембранами изучали методом скоростной фильтрации в присутствии 40 мМ ЭДТА, полностью ингибирующего активность эктонуклеотидаз. При изучении конкурентного замещения [3Н]АТР различными нуклеотидами (ADP, АМР, GTP, GMP), аденозином и избытком β-глицерофосфата показано, что только АDР в эквимолярной концентрации конкурирует с АТР за связывающие участки. Анализ равновесного связывания в координатах Скэтчарда выявил наличие на мембранах одного класса рецепторов, связывающих АТР с высоким сродством (Кd ~ 50-60 нМ) и связывающей емкостью (Bmах) 5-7 нмоль/мг белка. Вероятно, изученные АТР-связывающие центры являются нуклеотидсвязывающим компонентом Р2 пуриновых рецепторов и в то же время сопряжены с каталитическим участком АТРазной молекулы.