БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 10, с. 1458–1477
Стабильный конформер IGG, полученный кислотным воздействием: исследование с помощью калориметрии, связывания CIq компонента комплемента и моноспецифических анти-IGG
Поступила в редакцию 08.06.1994
Аннотация
Термодинамическая стабильность и функциональная активность кроличьего IgG в его нативной конформации и после инкубации при рH 2 исследованы с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии и связывания конформационных зондов – компонента Clq комплемента и двух моноспецифических антител к IgG. Последние избирательно реагировали с «шарнирным» участком, соединяющим Fab и Fe фрагменты IgG, либо с CH2 доменом в составе Fe фрагмента. Методами спектроскопии КД и сканирующей калориметрии показано, что при pH 2 полного разворачивания (денатурации) молекулы IgG не происходит: белок демонстрирует наличие вторичной и компактной третичной структур, однако отличается от нативной конформации снижением интегральных величин энтальпии и температуры термоденатурации, а также параметрами вторичной структуры. После инкубации IgG при pH 2 последующая инкубация при нейтральных pH приводит к необратимым конформационным изменениям. Наиболее существенные отличия двух конформеров IgG зарегистрированы калориметрией при pH 3,5 и показано, что полученный кислотным воздействием конформер IgG отличается от нативного увеличенной термостабильностью СН2 домена. Комбинацией термодинамических и функциональных исследований установлено, что причиной стабилизации СН2 домена Fe фрагмента является увеличение степени его взаимодействия с СН1 доменом Fab фрагмента. Следствием этого является усиление функциональной взаимосвязи между антигенсвязывающими доменами и Clq-связывающим центром в СН2 домене конформера IgG, полученного кислотным воздействием. Увеличение стабильности СН2 домена сопровождается конформационными изменениями в «шарнирной» области, но не изменяет конформацию самого СН2 домена (по данным взаимодействия с моноспецифическими анти-IgG и Clq). Полученные результаты демонстрируют один из возможных механизмов, посредством которых функционально важные конформационные перестройки в молекуле IgG могут быть достигнуты изменением взаимодействия инвариантных по своей структурной организации доменов, а не изменением конформации самих доменов.