БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 10, с. 1445–1457
Химическая модификация миоглобина изотиоцианатными реагентами. Влияние модификации N-концевой аминогруппы на конформацию белка
Поступила в редакцию 27.05.1994
Аннотация
Проведена химическая модификация мет-Mb кашалота флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) и метилизотиоцианатом (МИТЦ). С помощью ионообменной хроматографии выделены индивидуальные производные мет-Мb, ФИТЦ-Мb и МИТЦ-Мb, модифицированные по α-аминогруппе Val 1 (NA1), с выходом 10 и 30% соответственно. Найдено, что в МИТЦ-Мb наряду с аминогруппой тиокарбамилирован Гис 12 (А10). Изучены спектры поглощении, кругового дихроизма мет-Мb, ФИТЦ-Mb и МИТЦ-Мb в УФ- и видимой области и спектрофотометрическое титрование в полосе Соре. В интервале pH 2-13 исследована триптофановая флуоресценция интактных и модифицированных апо- и холомиоглобинов. Найдено, что модификация N-конца миоглобина не влияет на конформацию (α-спиральность) полипептидной цепи, но вызывает характерные отличия в спектрах поглощения, кругового дихроизма, значениях рК мет-гидрокси-перехода и pH-зависимой флуоресценции модифицированных производных, которые, с одной стороны, свидетельствуют об изменении конформации N-конца миоглобина, а с другой – об изменениях в структуре гемового окружения. Равновесие высоко- и низкоспиновых изомеров аквакомплекса в ФИТЦ-Мb и МИТЦ-Мb смещается по сравнению с мет-Мb в сторону низкоспинового изомера.