БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 8, с. 1254–1265
Новый метод определения активности рибофлавинкиназы
Поступила в редакцию 13.04.1994
Аннотация
Разработан новый метод определения активности рибофлавинкиназы (АТР:рибофлавин-5′-фосфотрансферазы; КФ 2.7.1.26), фосфорилирующей рибофлавин с образованием FM N. Метод основан на избирательном активном транспорте непрореагировавшего субстрата высокоспецифичной рибофлавинпермеазой в клетки мутантного штамма дрожжей Pichia guilliermondii ВКПМ Y-432. После удаления дрожжевых клеток из реакционной смеси активность рибофлапинкиназы определяется измерением количества образовавшегося в ферментативной реакции FMN прямой флуориметрией исследуемой пробы. Метод прост в исполнении и позволяет определять активность рибофлавинкиназы с высокой чувствительностью – до 0,5 мкЕ/мл пробы. Показана возможность применения метода для определения активности рибофлавинкиназы в препаратах различной степени чистоты, исследования свойств и кинетики действия фермента, определения кинетических параметров (V, Km, Кi) для субстратов, синтетических субстратных аналогов витамина B2 и ингибиторов фермента.