БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 6, с. 873–880
Гликолитические ферменты в эритроцитах человека: ассоциация глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы с 3-фосфоглицераткиназой
Поступила в редакцию 26.01.1994
Аннотация
Исследована возможность ассоциации глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) и 3-фосфоглицераткиназы (3-ФГК) в эритроцитах человека. Показано, что с помощью иммобилизованных моноклональных антител, специфических в отношении ГАФД, можно изолировать из гемолизата эритроцитов человека прочный комплекс ГАФД и 3-ФГК. Комплекс не распадается при высокой ионной силе (до 0,3 М хлористого натрия), но может диссоциировать в присутствии специфических лигандов, взаимодействующих с ГАФД и 3-ФГК (например, 1,3-дифосфоглицерата). Исследовано также взаимодействие между изолированными из эритроцитов ГАФД и 3-ФГК. Для определения параметров связывания использована иммобилизованная ГАФД из эритроцитов и растворимая 3-ФГК из того же источника. Показано, что на 1 моль иммобилизованного тетрамера ГАФД связывается около 2,3 моль мономерной 3-ФГК с Kd 2,4 мкМ. В тех же экспериментальных условиях ферменты из мышц кролика образуют более слабые (Кd 3,8 мкМ), а ферменты из дрожжей – более прочные комплексы (Kd 1,5 мкМ). При изучении биферментных комплексов, в которых партнеры выделялись из разных организмов, было обнаружено, что прочность ассоциации снижается по сравнению с парами ферментов, изолированных из одного источника. В случае пар ферментов, выделенных из филогенетически отдаленных источников (например, дрожжи и ткани млекопитающих), комплексы обнаружить не удается. Обсуждается видоспецифичность ассоциации двух ферментов, а также возможные причины присутствия столь прочных комплексов в лизатах эритроцитов.