БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 5, с. 648–655
Очистка и характеристика холестеролэстеразы Pseudomonas mendocina 3121
Поступила в редакцию 03.07.1993
Аннотация
Из фильтрата культуральной жидкости штамма Pseudomonas mendocina 3121 выделена и очищена холестеролэстераза (ХЭ) по методике, включающей сорбцию посторонних белков на геле фосфата кальция, осаждение сернокислым аммонием, изоэлектрическое осаждение сопутствующих белков при pH 5,4, хроматографию на Toyopеarl НW-55F. Удельная активность очищенного фермента – 31 ед/мг. Молекулярная масса фермента, определенная методом гель-хроматографии, – 62 кДа, методом электрофореза с Ds-Na – 30 кДа, pH-Оптимум ферментативной реакции 7,3. Фермент стабилен в интервале pH 5,0- 10,0 при температуре до 50° в течение. 30 мин. Температурный оптимум ферментативной реакции 55°. Изоэлектрическая точка (pl) 5,95. Холестеролэстераза не обладает строгой субстратной специфичностью. Константа Михаэлиса для холестероллинолената, холестероллинолеaта, холестерололеата и холестеролпальмитата составляет 2,0; 2,5; 4,5 и 30,7 мМ соответственно. Холестеролэстеразу Ps. mendocina 3121 ингибируют ионы тяжелых металлов: Ag+, Zn2+, Cu2+. Константы ингибирования соответственно равны 0,01; 0,26 и 21 мМ. Определен аминокислотный состав холестеролэстеразы.