БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 4, с. 559–567
Медленные конформационные переходы в мышечной гликогенфосфорилазе b, индуцируемые специфическими лигандами
Поступила в редакцию 16.11.1993
Аннотация
Изучено влияние специфических лигандов на начальную скорость гидролиза трипсином гликогенфосфорилазы b из скелетных мышц кролика. Кинетика трипсинолиза изучена по снижению интенсивности флуоресценции фосфорилазы b при 335 нм (возбуждение флуоресценции при 290 нм). Кинетические кривые линейны на протяжении по меньшей мере 400с (0,02 М HEPES, pH 6,8; 37°). Аллостерический активатор (АМР) и аллостерические ингибиторы (флавины) защищают фосфорилазу b от гидролиза трипсином в том случае, когда трипсин добавлен к ферменту, преинкубированному с лигандом. Обнаружены различия между кинетическими кривыми в опытах с добавлением смеси трипсина с лигандом (АМР, флавин или субстрат – глюкозо-1-фосфат) к фосфорилазе b и добавлением трипсина к ферменту, преинкубированному с лигандом в течение 10 мин. Сделан вывод о том, что изученные специфические лиганды вызывают относительно медленные конформационные переходы в молекуле фосфорилазы b со временами полупревращения, составляющими несколько минут.