БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 4, с. 543–550
Взаимодействие комплекса лактатдегидрогеназа NAD-пируват с мембранами легкого саркоплазматического ретикулума
Поступила в редакцию 10.11.1993
Аннотация
Лактатдегидрогеназа из скелетных мышц свиньи катализирует реакцию образования ковалентной связи между пируватом и NAD+, что приводит к потере активности фермента, так как образующийся непродуктивный комплекс практически не диссоциирует в условиях протекания реакции. Возникновение комплекса лактатдегидрогеназы с NAD-пируватом (аддуктом) может быть зарегистрировано как по собственному поглощению аддукта, так и по изменению флуоресценции 2-толуидиннафталин-6-сульфоната, связанного с лактатдегидрогеназой. Активность фермента восстанавливается при добавлении к непродуктивному комплексу мембран легкого саркоплазматического ретикулума. Для ее полного восстановления требуется около 2 ч. После этого активность фермента одинакова в пробах, исходно содержавших нативный фермент, и пробах, содержавших комплекс ЛДГ-NAD-пиpyвaт различной стехиометрии. Восстановление активности ЛДГ происходит в результате диссоциации аддукта из комплекса с белком в присутствии мембран. Образующееся при этом дициклическое производное аддукта может быть отделено от белка при гель-фильтрации и идентифицировано по спектру поглощения. Взаимодействие с мембранами саркоплазматического ретикулума энзиматически неактивного комплекса ЛДГ-NAD-пиpyвaт может служить механизмом восстановления активности фермента в условиях клеточного окружения.