БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 3, с. 410–418
Изучение конформационных изменений сопрягающего фактора хлоропластов методом кислотно-щелочного титрования
Поступила в редакцию 09.07.1993
Аннотация
Методом кислотно-щелочного титрования проведено исследование состояния ионогенных групп в структуре сопрягающего фактора CF1 хлоропластов. Показано, что в диапазоне pH 3,0-9,0 около 330 ионогенных групп CF1 связывают протоны. Около 180 ионогенных групп в молекуле нативного белка недоступны титранту. Эти группы выявляются при денатурации фермента детергентом Ds-Na. Кривая титрования определяется в основном карбоксильными группами, принадлежащими α- и β-субъединицам CF1. Около половины карбоксильных групп в молекуле фермента имеют аномально высокие значения pK : 5,5-5,7. Обнаружено явление кислотноосновного гистерезиса титрования CF1, проявляющегося в различии кривых кислотного и щелочного титрования в диапазоне pH 5,0-9,0. Гистерезис не устраняется при снижении скорости титрования и не связан с pH-индуцируемой денатурацией белка, так как воспроизводится в последующем цикле титрования. Причиной гистерезиса являются pH-зависимые конформационные изменения фермента. Связывание ADP сопровождается уменьшением количества титруемых групп в диапазоне pH 5,0-9,0. Активаторы АТРазной реакции – октилглюкозид и ATP – затрудняют протонирование CF1 в диапазоне pH 7,0-9,0. Тритон Х-100 не меняет каталитических свойств CF1, но увеличивает протонирование 100 ионогенных групп фермента. Сделан вывод о существовании связи между конформационными изменениями CF1 и ионизацией групп фермента.