БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 3, с. 402–409
Природа многокомпонентности образования интермедиата M при фотоцикле бактериородопсина. III. кинетический анализ действия азида на фотоцикл бактериородопсина D96N
Поступила в редакцию 03.06.1993
Аннотация
Образование интермедиата М у мутантного бактериородопсина D96N хорошо описывается суммой трех экспоненциальных составляющих с τ1 – 55, τ 2 -220 мкс и τз = 1 мс (pH 7,0, 20°). Те же три компоненты присутствуют в распаде интермедиата – L. Для выявления природы трех кинетически различимых форм М исследовано действие азида на фотоцикл бактериородопсинового мутанта D96N. Обнаружено, что в присутствии 2 М азида натрия при pH 5,0 распад М ускоряется до 20 мкс, причем протонированная форма азотистоводородной кислоты способна воздействовать на все три формы М одновременно. Таким образом, pK основания Шиффа возрастает немедленно после депротонирования. Первые две компоненты распада L при этом остаются неизменными, а третья, 1 мс-компонента исчезает. Она появляется в переходе батоформы с дифференциальным максимумом при 630 нм, образующейся в присутствии азида, в батоформу с дифференциальным максимумом при 638 нм, которая в свою очередь за 5 мс превращается в интермедиат N. Сделан вывод, что в фотоцикле бактериородопсина D96N образуются независимо друг от друга два М, находящихся в равновесии с двумя L, а 1 мс-компонента, по всей видимости, отражает конформационную перестройку белка и необратимый М→ М’-переход.