БИОХИМИЯ, 1994, том 59, вып. 1, с. 102–112
Кинетика экспрессии генов люцифераз светляков Photinus pyralis и Luciola mingrelica в клетках Escherichia coli. I. кинетика трансформации рекомбинантных люцифераз в ферментативно-активные конформеры
Поступила в редакцию 25.05.1993
Аннотация
Кинетика экспрессии генов люцифераз светляков Photinus pyralis и Luciola mingrelica на плазмидах рМЕ61 и pJGλ соответственно с термоиндуцибельным λРR-промотором в клетках Е. coli, штамм СА, при инкубировании культур по температурным схемам 28-42-21° и 28-21○ изучена тремя независимыми методами: 1) электрофоретически, по количеству синтезированного белка люциферазы; 2) методом ИФА и 3) по ферментативной активности. Показано, что после трехчасовой термоиндукции (42°) по данным электрофореза количество синтезированного белка люциферазы Ph. pyralis достигает 4,5%, а люциферазы L. mingrelica– 4,1% всех белков клетки за 10 ч и далее не меняется. При инкубации клеток в постиндукционный период при температуре 21° количество нативного конформера и активность люцифераз после длительного периода индукции (40-50 ч) начинают расти, достигая через 50-60 ч максимальных значений. Возрастание активности фермента коррелирует с увеличением содержания АТP в клетке. Обнаруженное явление «низкотемпературной индукции» активности ферментов объяснено переходом белка в каталитическую активную форму, который по времени значительно отстает от процесса биосинтеза белка.