БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 9, с. 1408–1419
Влияние структурной организации ассоциатов холестерина в водноорганических средах на реакцию его окисления, катализируемую холестериноксидазой.
Поступила в редакцию 20.11.1993
Аннотация
Изучены способ проведения реакции окисления холестерина холестериноксидазой в гомогенных водноорганических смесях без применения поверхностно-активных веществ (ПАВ) и влияние параметров реакционной среды на исследуемый процесс. Показано, что природа органического растворителя и соли буфера, pH и «возраст» растворов холестерина обусловливают формирование «субстратных» свойств молекул стерина в ассоциатах, что проявляется в изменении кинетических параметров реакции и спектрофотометрической характеристике продукта ферментативного окисления холестерина – 4-холестен-3-она. Названные изменения под влиянием перечисленных факторов наиболее ярко выражены при окислении «состарившихся» растворов холестерина, приготовленных за 24 ч до проведения реакции. При этом уменьшаются максимальная скорость реакции, константа Михаэлиса холестериноксидазы по холестерину и величина эффективного коэффициента молярной экстинкции 4-холестен-3-опа. Предварительная обработка «состарившихся» растворов холестерина ультразвуком приводит к увеличению перечисленных параметров. Наблюдаемые явления, по-видимому, обусловлены разной степенью агрегации молекул холестерина в растворах. Обсуждены также другие причины, влияющие на величину коэффициента молярной экстинкции 4-холестен-3-она, в частности гипохромизм и рассеянный белый свет в спектрофотометре. Фермент характеризуется широким pH-оптимумом действия с максимумом активности при pH 7,0. Константа Михаэлиса холестериноксидазы для холестерина в области исследованных pH 6,0-8,0 практически не меняется и для свежеприготовленных растворов, содержащих 10%-ный пропанол 1, составляет ~15 мкМ. Величина каталитической константы в этих же условиях при 20° и pH 7,0 ~22 с-1.