БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 6, с. 896–907
Выделение и характеристика металлопротеиназы Bacillus megaterium.
Поступила в редакцию 10.07.1992
Аннотация
Последовательным применением аффинной хроматографии на бацитрацин-силохроме, гель-фильтрации на акрилексе П – 10, рехроматографии на бацитрацин-сефарозе 4В и гель-фильтрации на сефадексе G-25 из культуральной жидкости В. megaterium штамм 599 была выделена гомогенная металлопротеиназа с молекулярной массой 35000 Да. Определены аминокислотный состав и N-концевая последовательность (20 аминокислот). Протеиназа не ингибируется диизопропилфторфосфатом, ингибируется о-фенантролином, ЭДТА, Zn2+, но активируется Со2+. Фермент проявляет максимум активности при 60-65°. Максимум ферментативной активности по гидролизу синтетических субстратов лежит при pH 6,5-7,0. Фермент стабилен при pH 7,0-9,0 и сохраняет стабильность при 45-60° в течение нескольких часов. В кислых средах фермент необратимо инактивируется. Зависимость kкат/Кт от pH указывает на участие в катализе ионогенной группы с рКа 7,5, вероятнее всего – имидазола гистидина. Исследуемая металлопротеиназа гидролизует синтетические пептидные субстраты по связям, образованным аминогруппами гидрофобных аминокислот (Phe, Leu, Не, Val).