БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 4, с. 636–647
Фосфорилирование глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы.
Поступила в редакцию 05.05.1992
Аннотация
Показано, что экстракты скелетных мышц и мозга кролика обладают способностью достаточно эффективно фосфорилировать глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, причем такое фосфорилирование осуществляется Са2+-зависимыми протеинкиназами (Са2+/фосфолипид- и Са2+/кальмодулин-зависимыми). Данные протеинкиназы прочно связываются с иммобилизованной на сефарозе глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой. Элюция с такого аффинного сорбента может быть проведена при промывании колонки растворами дегидрогеназы или специфических антител на этот фермент. Наиболее полная элюция протеинкиназ достигается в условиях, вызывающих диссоциацию иммобилизованного тетрамера дегидрогеназы на димеры, что и было использовано для разработки метода выделения Са2+/кальмодулинзависимой протеинкиназы, включающего стадию отделения примеси ГАФД при хроматографии на фенилсефарозе. Способность ГАФД фосфорилироваться протеинкиназами экстрактов тканей подтверждается и тем, что выделенные из мышц препараты ГАФД содержат значительные количества ковалентно-связанного эндогенного фосфата – от 0,7 до 1,5 моль на 1 моль тетрамера дегидрогеназы.