БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 4, с. 562–573
Влияние ферментативного и химического дегликозилирования на физико-химические свойства глюкоамилазы из Aspergillus awamori X100/D27.
Поступила в редакцию 19.02.1992
Аннотация
Рассмотрено ферментативное дегликозилирование глюкоамилазы из Asp. awamori – гликопротеина, содержащего две N-гликозильно-связанные углеводные цепи и 46 коротких О-гликозильно-связанных углеводных цепей на 1 молекулу белка. Модификация О-гликозильно-связанной углеводной компоненты проводилась α-маннозидазой, отщепление N-гликозильно-связанной углеводной компоненты проводилось эндо-(β-N-ацетилглюкозоаминидазой F. Проведена химическая модификация углеводной компоненты белка воздействием NaI04 и трифторметансульфокислоты. Дегликозилирование белка уменьшает его стабильность и устойчивость к собственной секретируемой кислой протеиназе гриба. Анализируя конформационные изменения, происходящие при дегликозилировании, сделано предположение о существенном вкладе О-гликозильно-связанной углеводной компоненты в стабилизацию доменной структуры глюкоамилазы. Применена модификация углеводной компоненты, увеличивающая степень гликозилирования белка, с помощью ингибитора вовлеченных в процессинг а-маннозидаз-маннонаиримицина. Такая модификация приводит к заметному увеличению стабильности фермента.