БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 4, с. 550–561
Химическая активация α-галактозидазы из Trichoderma reesei.
Поступила в редакцию 19.02.1992
Аннотация
Фермент α-галактозидаза (мелибиаза, К Ф 3.2.1.22) выделен из культуральной жидкости мицеллиального гриба Trichoderma reesei. Молекулярная масса 53,5 кДа, изоэлектрическая точка pI 5,25. Косвенные данные свидетельствуют о простетической сульфгидрильной группе в активном центре. Группа титруется меркурибензоатом, но не обнаруживается реактивом Эллмана и дипиридилдисульфидом. Под действием перекиси водорода активность фермента со временем значительно возрастает. При этом увеличиваются константы Михаэлиса для n-нитрофенил-α-D-галактопиранозида и мелибиозы, а также константа конкурентного ингибирования для D-галактозы. Изменяется зависимость активности от pH: правая граница активности смещается в кислую область на 1,8 единицы. В анаэробных условиях при pH 5,95 тиолы инактивируют активированный фермент, но не нативный. Присутствие галактозы ослабляет как активацию, так и инактивацию фермента. Расчетное увеличение активности при полной активации достигает 12 при 37° и 35 при 25°. И нативный, и активированный фермент проявляют высокую стабильность в растворе и при лиофилизации. Предполагается, что перекись окисляет простетическую сульфгидрильную группу —SH до сульфеновой —SOH. Последняя стабилизируется микроокружением в активном центре и эффективно катализирует гидролиз гликозида.