БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 3, с. 416–423
Свойства β-каротин-15,15′-диоксигеназы, стабилизированный в процессе выделения лютеином дитиотреитолом.
Поступила в редакцию 16.03.1992
Аннотация
Сравнение свойств препарата β-каротин-15,15′-диоксигеназы (КФ 1.13.11.21), стабилизированного в процессе выделения лютеином и дитиотреитолом, со свойствами нестабилизированного препарата показало, что они близки. Стабилизированный препарат имеет кажущуюся Кт=17 мкМ и V=2,8 нмоль ретиналя/ч на 1 мг белка, оптимум pH 8,1, чувствителен к SH-агентам, активируется Fe2+, дитиотреитолом или глутатионом при оптимальных концентрациях 0,5, 2 и 5 мМ соответственно. При концентрации дитиотреитола выше 2 мМ активность β-каротин-15,15′-диоксигеназы резко снижалась, что свидетельствует о необходимости поддержания оптимального соотношения тиольных и дисульфидных групп. При 4 мМ Fe2+ происходит неферментативное образование апо-каротиналей, а ретиналь образуется только при введении сопоставимого количества сульфгидрильных соединений. Активность фермента зависела от концентрации и свойств ионов в инкубационной среде, максимальный эффект наблюдался при использовании 0,4 М калий-фосфатного буфера, замена фосфата на Сl – вызывала частичное ингибирование фермента. Оптимальная температура реакции 45°. Одновременное использование оптимальных параметров инкубации — 2 мМ дитиотреитола, 0,4 М калий-фосфатного буфера, pH 8,1, при 45° увеличивало выход ретиналя по сравнению с контролем в 2,5 раза.