БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 3, с. 348–356
Модификация гистидиновых остатков РНК-лигазы диэтилпирокарбонатом.
Поступила в редакцию 25.10.1991
Аннотация
На модельном белке дрожжевой гексокиназе исследована пригодность трис-HCl-буфера для проведения модификации гистидиновых остатков диэтилпирокарбонатом (ДЭПК). Показано, что модификация происходит достаточно селективно и при pH 7,5. Определены условия модификации одного гистидинового остатка в молекуле белка. Показано, что в 30 мМ трис-НСl-буфере, pH 7,5, при взаимодействии с 0,3 мМ ДЭПК в течение 10 мин в молекуле РПК-лигазы модифицируется один гистидиновый остаток, что в 3 раза уменьшает способность образовать ковалентный АМР-РНК-лигазный комплекс. Обнаружено, что модификация двух гистидиновых остатков в молекуле РПК-лигазы приводит к полной потере ферментативной активности. При увеличении концентрации ДЭПК модификации подвергаются все семь гистидиновых остатков РНК-лигазы. Определены и сравнены кинетические параметры (Km и V) нативного и модифицированного ферментов.