БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 2, с. 224–233
Особенности взаимодействия ДНК-полимеразы I Escherichia coli и ее большого фрагмента с γ-n-азидоанилидом dTTP.
Поступила в редакцию 12.12.1991
Аннотация
Исследована фотоаффинная модификация ДНК-полимеразы I и фрагмента Кленова γ-п-азидоанилидом dTTP. Аналог оказался ингибитором смешанного типа по отношению к dTTP реакции полимеризации dNTP, катализируемой ДНК-полимеразой I и фрагментом Кленова. УФ-Облучение в отсутствие реагента приводит к быстрой инактивации обеих форм фермента. Субстраты (dNTP и матрично-затравочный комплекс) с разной эффективностью предохраняют ферменты от инактивации УФ-светом, а в случае ДНК-полимеразы I в присутствии матрично-затравочного комплекса происходит увеличение полимеризующей активности по сравнению с контролем. Действие AzdTTP условиях облучения на две формы фермента различно: при концентрации 10-5 М ускоряет процесс активации ДНК-полимеразы I, вызванный облучением, а при концентрации 10-4 М инактивирует фермент на 20-25%. В этих условиях происходит ковалентное связывание двух молекул azdTTP с молекулой фермента. Комплементарный по отношению к матрице субстрат (dTTP) предохраняет ДНК-полимеразу I как от инактивации, так и от модификации, некомплементарный (dCTP) – от модификации, но не от инактивации. В отличие от ДНК-полимеразы I большой фрагмент фермента не активируется под действием УФ-света, a azdTTP не модифицирует его и не оказывает существенного влияния на полимеризующую активность фрагмента. На основании полученных результатов предполагается существование у ДНК-полимеразы I дополнительного регуляторного участка, ответственного за связывание dNTP.