БИОХИМИЯ, 1993, том 58, вып. 1, с. 43–49
Исследование ДНК-зависимой РНК-полимеразы фага Т7 с помощью аналогов GTP. Аффинная модификация флуоресцентными метками и исследование взаимодействия с матрицей.
Поступила в редакцию 29.05.1992
Аннотация
Исследовано взаимодействие ДНК-зависимой РНК-полимеразы бактериофага Т7 с тремя аналогами GTP, содержащими в составе молекулы остатки замещенных нафталинсульфокислот. Показано, что все три соединения являются в определенных условиях необратимыми ковалентными модификаторами фермента, причем модифицированный фермент обладает флуоресцентными свойствами и каталитически неактивен. В результате модификации аналогом, содержащим реакционноспособную 2-бромэтилфосфонатную группировку в 5′-положении гуанозина, фермент утрачивает способность к связыванию с полинуклеотидными матрицами. Модификация фермента двумя другими аналогами (реакционноспособная группа – азид) не изменяет его сродства к матрице; при связывании с полинуклеотидами интенсивность флуоресценции модифицированного фермента возрастает. Полученные данные позволяют сделать вывод о пригодности этих двух флуоресцентных меток для исследования фермент-про- моторных взаимодействий при помощи флуориметрии.