БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 12, с. 1902–1912
Функционально важный остаток глутаминовой кислоты в пирофосфатазе E. coli. 1. химическая модификация и локализация в первичной структуре
Поступила в редакцию 25.02.1992
Аннотация
Неорганическая пирофосфатаза Е. coli быстро и необратимо инактивируется N-этил-5-фенилизоксазолий-З’-сульфокислотой (реагентом Вудворда К). В спектре поглощения белка появляется максимум при 340 нм, что свидетельствует об образовании енольного эфира фермента с ингибитором. Негидролизуемый аналог субстрата, CaPPi, частично защищает пирофосфатазу от действия реагента. Из триптического гидролизата инактивированного фермента выделен пептид, содержащий остаток аминокислоты, модификация которой критична для активности. Он занимает в аминокислотной последовательности пирофосфатазы участок с 95-го по 104-й остаток и содержит четыре остатка дикарбоновых аминокислот. Из гидролизата модифицированной пирофосфатазы, полученного с протеазой V8, также выделен пептид с остатком модифицированной аминокислоты. Он представляет часть триптического модифицированного пептида и имеет структуру Glu-Ala-Gly-Glu (98-101 остаток). Сделан вывод, что инактивация пирофосфатазы Е. coli реагентом Вудворда К является следствием селективной модификации Glu-98, по-видимому, наиболее реакционноспособной дикарбоновой аминокислотой из всех расположенных в активном центре фермента.