БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 11, с. 1627–1641
Выявление левоспиральных участков в ДНК эукариот
Поступила в редакцию 11.09.1991
Аннотация
Метод связывания ДНК с нитроцеллюлозными фильтрами был применен к ДНК, выделенной из печени и асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ) мышей, тимуса теленка и лимфоцитов людей, больных хроническим лимфолейкозом. Для всех указанных и ДНК фага РМ2 обнаружили S-образное увеличение связывания с фильтрами при повышении концентрации NaCl от 0,5 до 4,5 М, свидетельствующее о наличии конформационного перехода. Аналогичного свойства не проявили ДНК фага λ и однотяжевая ДНК. Связывание резко снижалось после слабого расщепления ДНК ДНКазой I или воздействия фосфолипазы С или рестриктаз Eco RI и Hin PI. При инкубировании ДНК с бромистым этидием происходило постепенное снижение доли связывающейся ДНК, эффект усиливался при повышении концентрации красителя. Используя метод оптического титрования, получили изотермы связывания бромистого этидия с ДНК эукариот в координатах Скетчарда, имеющие компоненту с положительным наклоном при низких значениях r. Двухвалентные ионы магния и цинка, сдвигающие равновесие в сторону Z-формы, увеличивали долю макромолекул, задерживаемых фильтрами, в интервале 1-3 М NaCl. Использованы химические зонды локальных изменений конформации спирали: диэтилпирокарбонат (гуанин Z-ДНК) и осмий-пиридиновый реагент (пиримидины B-Z-пограничных участков). Вводя эти реагенты в пробы ДНК печени, АКЭ и лимфоцитов, мы обнаружили наличие химической модификации в каждой из проб. Модификация ДНК с помощью осмий-пиридинового реагента приводила к ингибированию последующей рестрикции рестриктазой Eco RI. Высказано предположение о том, что полученные результаты свидетельствуют о наличии Z-участков в В-спирали ДНК эукариот. Предложена топологическая модель стабилизации Z-участков в небольших суперспиральных петлях ДНК, закрепленных с помощью молекул белка или липопротеида.