БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 10, с. 1574–1585
Исследование интермедиата N с помощью мутантных форм бaктepиoродопсина по Аsр-96
Поступила в редакцию 13.01.1992
Аннотация
Обнаружено, что в фотоцикле мутантного бактериородопсина Asp-96—Asn при низких значениях pH существует интермедиат типа N (Р, R). При добавлении азида, сильно ускоряющего распад интермедиата М, интермедиат N наблюдается и при нейтральных значениях pH. При этих условиях скорость распада N не зависит от pH. В присутствии азида поглощение протона мутантным белком Asp-96—Аsn происходит одновременно с исчезновением М, тогда как распад N происходит намного медленнее. В фотоцикле мутантного белка Asp-96—Asn переходу М—bR соответствуют две электрогенные стадии, быстрая и медленная, скорости которых близки скоростям переходов М—N и N — bR. При высоких концентрациях азида у мутантного пигмента Asp-96—Аsn скорость распада М интермедиата превышает скорость распада М у нативного бактериородопсина в присутствии азида и без него. Этот эффект не наблюдается для мутантного белка Asp-96—Glu. Энергии активации дли переходов М -N и N- bR, в нативном, белке равны 18 и 19 ккал/ моль-1 соответственно. У мутантного белка Asp-96—Asn энергии активации распада М составляет только 5 ккал/моль. В присутствии азида у этого белка энергии активации распада М и N близки и составляют 8 и 9 ккал/моль соответственно. Обсуждается возможная схема событий, сопровождающих процесс, репротoнирования основания Шиффа при фотоцикле.