БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 8, с. 1263–1270
Функционально важный остаток Tуг-89 пирофосфатазы S. cerevisiae. II. Возможная роль в механизме действия фермента
Поступила в редакцию 28.01.1992
Аннотация
Ранее установлено, что инактивация неорганической пирофосфатазы дрожжей под действием 7-хлор-4-нитробензофуразана обусловлена модификацией Туr-89. В настоящей работе изучено влияние на эту реакцию рH и лигандов активного центра. Установлено, что рК Туr-89 не превышает 8,5 комплекс фосфата с металлом, связываясь в центре высокого сродства на ферменте, защищает Туг-89 от действия реагента. Ионы-активаторы (Mg2+ и Zn2+ ) не влияют на инактивацию, тогда как ингибитор фермента Са2+ при заполнении центра высокого сродства увеличивает скорость инактивации, а при заполнении двух центров связывания защищает фермент. Увеличение скорости взаимодействия Туr-89 с реагентом в присутствии низких концентраций ионов кальция обусловлено снижением рК Туг-89. Полученные данные показывают, что Туг-89 находится вблизи центра связывания фосфата высокого сродства. Высокая реакционная способность Туг-89,жесткая фиксация в пространстве позволяют предполагать наличие водородной связи с субстратом и роль донора протона, акцептором которого является продукт ферментативной реакции – фосфат.