БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 8, с. 1255–1262
Функционально важный остаток тирозина в пирофосфатазе S. сеrеvisiае. I. Химическая модификация и локализация в первичной структуре
Поступила в редакцию 28.01.1992
Аннотация
Неорганическая пирофосфатаза S. cerevisiae (РРаза) эффективно инактивируется 7 хлор-4-нитробензофуразаном, аналог субстрата CaPPi оказывает защитный эффект. Модифицированный фермент, отделенный от низкомолекулярных веществ, имеет спектр поглощения с максимумом при 345 нм. Предварительная модификация SH-rpyпп РРазы не влияет на взаимодействие фермента с реагентом. Инактивированная РРаза восстанавливает активность под действием β-меркаптоэтанола, следовательно, причиной ингибирующего действия реагента является модификация остатков тирозина. Из триптического гидролизата модифицированной РРазы по специфическому поглощению выделен единственный пептид, содержащий остаток реагента. В первичной структуре РРазы этот пептид занимает положения 82-111 и содержит два остатка тирозина. Гидролиз выделенного пептида химотрипсином и определение структуры образовавшихся фрагментов с помощью двух методов — масс-спектрометрии и автоматического секвенирования – позволили сделать вывод, что инактивация РРазы является следствием селективной модификации, остатка Туг-89.