БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 8, с. 1230–1241
Сериновая протеиназа архебактерии Hаlobаcterium mediterranei — аналог субтилизина эубактерий
Поступила в редакцию 09.12.1991
Аннотация
Из фильтрата культуральной жидкости зкстремального галофильного микроорганизма Halobacterium mediterranei 1538 аффинной хроматографией на бацитрацин-сефарозе, ультрафильтрацией и гель-фильтрацией на сефадексе G-75 выделена гомогенная протеиназа, очищенная в 260 раз, с выходом 48%. Протеиназа полностью ингибируется специфическими ингибиторами сериновых протеиназ – фенилметилсульфонилфторидом, диизопропилфторфосфатом, а также п-хлормеркурибензоатом и ацетатом ртути. Фермент проявляет жесткую зависимость от концентрации NaCl в среде, при концентрации соли ниже 0,75 М протеиназа полностью инактивируется. Добавление 2 -7% органических растворителей приводит к быстрой потере активности на 100%. Оптимум pH, определенный по расщеплению GIp-Ala-Ala-Leu-pNA – 8-8,5, Km = 0,14 мM, kcat = 36,9 с-1, фермент наиболее стабилен при pH 5,5 -8,5. Температурный оптимум 55°, молекулярный вес 41000 Да, рI – 7,5, Субстратная специфичность изученной сериновой протеиназы укладывается в рамки специфичности,секреторных субтилизинов и по глубине гидролиза сравнима с действием протеиназы К. N-концевая последовательность аминокислот обнаруживает 50% гомологию с термитазой: Asp-Thr-Ala-Asn Аsр-Рго-Lys-Tyr-Gly-Ser-Gln-Tyr-Ala -Pro-Gln-Lys-Val-Asu-Ala-Asp. Таким образом, сериновая протеиназа H. mediterranei является близким аналогом субтилизиноподобных пpoтeинaз эубактерий и высших организмов.