БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 7, с. 1089–1099
Модификация дисульфида шарнирной области IgG кролика и исследование взаимодействия с поливалентным антигеном ферритином, белком A и анти-IgG
Поступила в редакцию 11.11.1991
Аннотация
Использование модифицированных иммуноглобулинов как реагентов иммунохимического анализа делает актуальной проблему получения реагентных антител с увеличенной антигенсвязывающей активностью. С целью оценки возможных подходов к активирующей модификации антител исследованы функциональные характеристики кроличьего IgG, модифицированного по дисульфиду шарнирной области тремя реагентами – иодацетамидом, N-этилмалеимидом и 2,2′-дипиридилдисульфидом. По данным гель-хроматографии модифицированный IgG кролика отличался от нативного белка несколько увеличенными гидродинамическими размерами молекулы. Методом иммуноферментного анализа показано, что модификация каждым из трех реагентов в одинаковой степени активирует связывание антител с поливалентным белковым антигеном – ферритином человека в результате увеличения подвижности Fab-фрагментов IgG относительно Fc-фрагмента (сегментной подвижности). Характер концентрационных зависимостей показывает, что кроме возрастания сегментной подвижности дополнительным фактором увеличения активности модифицированного IgG может быть увеличение внутри- или междоменной конформационной подвижности доменов, составляющих Fab-фрагмент IgG. С использованием белка А и анти-IgG как конформационных зондов Fе-фрагмента антител установлено, что конформация и конформационная динамика эпитопов СН2-доменов и зоны контакта СН2- и СН3-доменов остаются в значительной степени неизменными при модификации IgG.