БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 7, с. 1057–1064
Инсерционный мутагенез протеазы 2A вируса полиомиелита и ее субстрата, одновременно экспрессируемых в клетках Escherichia coli
Поступила в редакцию 27.09.1991
Аннотация
С целью изучения структурных детерминант, определяющих чувствительность природных субстратов к действию протеазы 2А полиовируса, создана система экспрессии в Е. coli кДНК участка генома полиовируса, кодирующего фрагмент полипротеина в районе стыка структурных и неструктурных белков и включающего С-концевую половину капсидного белка VP1, протеазу 2А и большую часть белка 2В. Вирусоспецифические продукты экспрессии созданной плазмиды обнаруживаются во фракции нерастворимых белков лизата бактериальных клеток. Они представлены в основном двумя белками, которые предположительно образовались в результате автокаталитического расщепления протеазой 2А экспрессируемого полипептида по сайту Tyr-Gly между белком VP1 и собственно протеазой. Образование вирусоспецифических продуктов расщепления блокируется в результате встраивания четырех аминокислотных остатков вблизи предполагаемого каталитического остатка гистидина протеазы. Результаты экспериментов по направленному изменению структуры сайта протеолиза показывают, что в чувствительном к действию протеазы 2А субстрате важные детерминанты специфичности локализованы в участке, фланкирующем расщепляемый дипептид Tyr-Gly со стороны его N-конца.