БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 7, с. 1049–1056
Репликативная цитозиновая ДНК-метилтрансфераза из образованного в присутствии 5-азацитидина хроматина проростков пшеницы
Поступила в редакцию 18.09.1991
Аннотация
При инкубировании срезанных проростков пшеницы в присутствии 5-азацитидина (10-50 мкг/мл) репликативное метилирование вновь синтезированной в листе ДНК,- резко (в 7-10 раз) подавлено. Из хроматина таких с сильно недометилированной ядерной ДНК проростков элюирован 1 М NaCl прочно связанный белок, который в присутствии [ метил-3Н] S-аденозилметионина (SAM) обладает ДНК-метилазной активностью. Этот белок осуществляет поддерживающее и de novo метилирование ДНК с образованием в ней меченых остатков 5-метилцитозина. Поскольку in vivo этот белок связан с новообразованной недометилированной ДНК, он, скорее всего, и является собственно репликативной ДНК-метилтрансферазой (ДНК-метилазой), осуществляющей модификацию цитозиновых остатков ДНК в составе репликативного комплекса. Лучшим субстратом в реакции метилирования этим белком является гомологичная асимметрично метилированная яДНК из находящихся в S-фазе клеток первого листа проростков пшеницы. Фермент очень слабо метилирует цнтозиновые остатки в синтетическом полинуклеотиде поли (dl-dC). По субстратной специфичности фермент сходен с ДНК-метилазой из зародышей пшеницы [9]. При электрофорезе в ПААГ в недиссоциирующих условиях выделенная ДНК-метилаза представлена практически гомогенным белком, а при злектрофорезе и присутствии DS-Na выявлены два полипептида с молекулярными массами 35 и 40 кДа. Один из них по массе сходен с З5 кДж компонентом препарата ДНК-метилазы из зародышей пшеницы [9).