БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 6, с. 927–936
Активация тромбином Na/H-oбменa в перитонеальных тучных клетках
Поступила в редакцию 24.10.1991
Аннотация
С помощью флуоресцентного зонда BCECF изучали изменения внутриклеточного pH (рНi) в перитонеальных тучных клетках крысы. α-Тромбин (0,1 нМ) вызывал двухфазное изменение pHi : начальное временное снижение рНi и последующее устойчивое повышение, обусловленное стимуляцией Na/H-обмена, который ингибировался EIPA и зависел от внеклеточного Na+. ДИФ-α тромбин (0,1 пкМ-1 нм) (каталитически неактивная форма с интактным центром узнавания) вызывал двухфазное изменение рНi, подобно α-тромбину, тогда как β/γ-тромбин (10-1000 пкМ) (каталитически активная форма с нарушенной структурой центра узнавания) вызывал лишь начальную фазу закисления. Модуляторы центра узнавания тромбина-α1-тимозин и гепарин блокировали способность фермента вызывать защелачивание рНi Нигерицин активировал Na/H-обмен в тучных клетках. Скорость активации Na/H- обмена, которую определяли в опытах с нигерицином, снижалась при повышении концентрации α-тромбина (от 0,1 пкМ до 1 нМ). Активация протеинкиназы С (ПКС) в тучных клетках РМА в концентрации 10 нМ приводила к защелачиванию цитоплазмы, вследствие активации Na/H- обмена, блокируемого EIPA. Ингибитор ПКС – H-7 подавлял увеличение рНi, вызываемое как РМА, так и α-тромбином. Закисление цитоплазмы, вызываемое α-тромбином, полностью блокировалось SITS в бескальциевой среде, а в среде, содержащей ионы Са, SITS тормозил снижение рНi. Закисление цитоплазмы тромбином, видимо, обусловлено как входом Са2+, так и активацией хлорного тока. Сделано заключение, что к активации Na/H-обмена тромбином приводит каскад внутриклеточных реакций с участием ПКС.