БИОХИМИЯ, 1992, том 57, вып. 4, с. 574–581
Реактивация и реконструкция гексамера глутаматдекарбоксилазы при взаимодействии ее димеров с пиридоксальфосфатом
Поступила в редакцию 24.07.1991
Аннотация
Исследовано соотношение между восстановлением активности и реконструкцией гексамера при взаимодействии неактивных димеров апофермента с пиридоксальфосфатом (ПЛФ). Показано, что восстановление ферментативной активности, спектральных свойств (появление спектра с максимумом при 340 нм), присущих исходному препарату, а также реконструкция гексамера происходит в зависимости от добавления ПЛФ и завершается, когда концентрация ПЛФ достигает величины, соответствующей его содержанию в нативной декарбоксилазе. Нативный гексамер холофермента и апофермента практически не содержит свободных сульфгидрильных групп, при денатурации DS-Na 10 остатков цистеина на субъединицу становятся доступными. Димер апофермента содержит восемь доступных остатков цистеина и два – скрытых. Образование гексамера из димеров сопровождается экранированием остатков цистеина. При добавлении половинного количества ПЛФ экранируются семь остатков цистеина в опытах с ДТНБ и шесть – в опытах с 4,4′-дитиодипиридином. Дальнейшее добавление ПЛФ приводит практически к полному исчезновению свободных сульфгидрильных групп.