БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 12, с. 2244–2252
Фенилаланил-тРНК синтетаза из экстремального термофила Thermus thermophilus: анализ каталитической эффективности и комплексообразования с тРНКрhe в зависимости от температуры.
Поступила в редакцию 18.04.1991
Аннотация
Исследована зависимость скорости реакции аминоацилирования тРНКрhe, катализируемой РhетРНК-синтетазой из экстремального термофила, от концентрации Mg2+, ионной силы и pH при различных температурах. Показано наличие узкого диапазона оптимальных концентраций Mg2+, зависимого от температуры. С помощью метода тушения флуоресценции остатков триптофана найдены величины констант диссоциации (Кd) комплексов фермента с двумя формами термофильной тРНКрhe, отличающимися предположительно по уровню метилирования, а также с тРНКРhe Е. coli и зависимость величин Кd от температуры. Кd комплекса с тРНКрhe Е. coli. увеличивается с повышением температуры (1,6*10-9 М при 45o и 2,9*10-9 М при 60°), а Кв комплексов с термофильными тРНКphe не изменяется для тРНК1Phe (2,5*10-9 М) и уменьшается для тРНК2рhе (2,60*10—9 М при 45° и 1,25*10-9 М при 60°), что может указывать на весомый вклад гидрофобных контактов в белок-нуклеиновые взаимодействия. Характерно, что в случае комплексообразования с термофильными TPHKphe ΔH° – величина положительная, а с тРНКphe Е. coli – отрицательная. Обнаружен значительный вклад положительного ΔS° в величину ΔG° в случае термофильной системы. Сравнение спектров флуоресценции свободного фермента и его комплексов с тРНКphe также указывает на значительные перестройки в ферменте в процессе комплексообразоваиия.