БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 11, с. 2077–2096
Тирозиновая протеинкиназа из коры мозга быка: очистка, характеристика свойств, белковые субстраты фосфорилирования и ингибиторы активности
Поступила в редакцию 13.03.1991
Аннотация
Проведены экстракция и хроматографическое фракционирование тирозиновых протеинкиназ, содержащихся в мембранной фракции коры головного мозга быка. Активность, принадлежащая тирозиновым протеинкиназам, полностью экстрагировалась из мембран 1 %-ным холатом натрия и элюировалась двумя пиками (пики I и II) при хроматографии экстракта на ДЭАЭ-Toyopearl в присутствии холата натрия. Тирозиновая протеинкиназа, доминирующая в мембранной фракции коры мозга и содержащаяся в пике I (~75% общей активности), была очищена в 1930 раз гель-фильтрацией на сефакриле S-300, хроматографией на гексил- и фенилсефарозе, рехроматографией на ДЭАЭ-Toyopearl и получена в количестве 20 мкг из 250 г мозга с выходом 3,8% и удельной активностью 3,9 нмоль на 1 мг белка в 1 мин. Очищенная протеинкиназа пика I представлена белком с Mг=62- 63 кДа (р62), способным автофосфорилироваться в присутствии [y-32P]ATP. Протеинкиназа р62 фосфорилировала енолазу, тубулин и кальпактин I, а также модельные субстраты в ряду: гистон H5>поли(Г, Т)п≥ гистон Н2А≥ поли(Г, А, Т)n, гистон H4>казеины, гистоны H1 и Н2В, поли (Г, А, Л, Т)n. Фермент специфичен к ионам Мn2+ в оптимальной концентрации ~1 мМ. KMnmatp составляет 0,3 мкМ, Кт для гистона Н5 и поли (Г, Т) n – 0,45 и 0,06 мг/мл соответственно. Ингибирование активности протеинкиназы р62 происходит под действием NaCl (IC50= 75-100 мМ), а также кверцетина, адриамицина и лазалоцида (IС5о= 14—34, 23 и 90 мкМ соответственно). Предполагается, что протеинкиназа р62 аналогична протеинкиназе гена c-src.