БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 10, с. 1787–1797
Целлобиогидролаза Сlostridium thermocellum, образуемая рекомбинантным штаммом Е. coli.
Поступила в редакцию 26.12.1990
Аннотация
Из рекомбинантного штамма Е. coli К12, С600, несущего плазмиду pCU 304 со вставкой хромосомной ДНК Clostridium thermocelum, выделена целлобиогидролаза С. thermocellum. G помощью хроматографии на ультрагеле АсА, ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-сефарозе CL-6B, повторной хроматографии на ультрагеле и высокоэффективной ионообменной хроматографии на носителе Mono Q фермент очищен в 1530 раз с выходом 17%. По данным электрофореза в неденатурирующих условиях в градиентном полиакриламидном геле и изоэлектрофокусирования ферменту соответствует единственная активная белковая полоса с Mr=56,2±1 кДа и pI 4,15. Фермент практически не разжижает раствор КМ-целлюлозы, по образует восстанавливающие сахара (удельная активность 5.5 Е/мг). При гидролизе кристаллической (активность 2,3·10^-3 Е/мг) и аморфной (2,8·10^-2 Е/мг) целлюлозы в качестве основного продукта (93—97 %) образуется целлобиоза. Максимальная активность наблюдается при 60° и pH 5,6. Время полуинактивации при 60 и 65° составляет 450 и 15.5 мин соответственно. По характеру действия на низкомолекулярные флуорогенные субстраты фермент является типичной целлобиогидролазой.