БИОХИМИЯ, 1991, том 56, вып. 9, с. 1567–1577
Количественное определение и обратимая модификация сульфгидрильных групп низко- и высокомолекулярных соединений с использованием бирадикальной спиновой метки.
Поступила в редакцию 04.03.1991
Аннотация
Предлагается принципиально новый метод количественного определения сульфгидрильных групп низко- и высокомолекулярных соединений. В основе метода лежит использование бирадикальной спиновой метки с дисульфидной связью RS—SR. где R – имидазолиновый радикал. Показано, что данный бирадикал участвует в реакции тиол-дисульфидного обмена с тиолами, при этом спектры ЭПР исходного бирадикала и монорадикальных продуктов существенно различаются. Это позволило определить бимолекулярную константу скорости реакции бирадикала с цистеамином, цистеином, глутатионом и сывороточным альбумином человека. Предложенный метод был использован для определения глутатиона и цистеина в крови мышей и крыс, для определения активности ацетилхолинэстеразы насекомых и обратимого ингибирования NADPH-цитохром Р-450-редуктазы. Метод обладает высокой чувствительностью (10^-6 — 10^-7 М) сульфгидрильных групп и позволяет определять тиольные группы в окрашенных и непрозрачных растворах.